Khảo sát một số điều kiện nuôi cấy in vitro tế bào đơn nhân được chiết từ máu ngoại vi người
Nghiên cứu do các tác giả Nguyễn Thanh Thy, Lê Thị Thảo Nguyên và Nguyễn Thị Minh Thuận đang công tác tại Bộ môn Sinh hóa, Khoa Dược, Trường Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh thực hiện.
Các bệnh lý liên quan đến rối loạn hệ miễn dịch ngày càng phổ biến. Nguyên nhân có thể do tình trạng suy giảm miễn dịch hoặc do đáp ứng miễn dịch quá mức cần thiết. Trong trường hợp sức đề kháng của cơ thể giảm, cơ thể dễ bị tấn công bởi các tácnhân gây bệnh bên ngoài như: virus, vi khuẩn, nấm… và dễ mắc các bệnh lý nhiễm trùng, viêm nhiễm, ung thư… (Jantan et al., 2015). Mặt khác, nếu đáp ứng miễn dịch trở nên quá mạnh, trong một số trường hợp chống lại chính cơ thể, gây ra các bệnh lý tự miễn như: viêm khớp dạng thấp, thấp khớp, lupus, vảy nến, hen suyễn... (Wang et al., 2015). Trong dân gian, có rất nhiều dược liệu được người dân sử dụng thành bài thuốc y học cổ truyền để điều trị các bệnh lý liên quan đến bất thường hệ miễn dịch. Việc sử dụng các dược liệu trong y học cổ truyền mang lại những lợi ích nhất định cho bệnh nhân như giảm các tác dụng phụ đáng kể khi so sánh với dùng thuốc tân dược. Điều này mở ra một hướng nghiên cứu mới đầy tiềm năng cho dược học hiện đại bởi sự đa dạng và có sẵn của nguồn nguyên liệu dược liệu.
Ảnh minh họa: Internet
Nghiên cứu được thực hiện nhằm tối ưu hóa một số điều kiện nuôi cấy in vitro tế bào đơn nhân được phân lập từ máu ngoại vi người (peripheral blood mononuclear cells - PBMCs). Các tế bào PBMCs được phân lập trong vòng 4 giờ từ khi thu thập máu toàn phần của 10 người tình nguyện đã được chống đông bằng EDTA ethylenediaminetetraacetic acid) với ống Leucosep® 10 mL. Cho 100 µL hỗn dịch 5x105 tế bào/mLvào giếng trên đĩa 96 giếng, nuôi ở 37oC, độ ẩm 95 ± 5%, 5% CO2/24 giờ. Độ sống tế bào được khảo sát bằng phương pháp trypan blue, khảo sát dung môi hòa tan tinh thể formazan và các điều kiện nuôi cấy tế bào như nồng độ FBS (fetal bovine serum), mật độ tế bào PBMCs trong giếng, thời gian nuôi và nồng độ chất phân bào PHA (phytohaemagglutinin) cần cho sự tăng sinh PBMCs.
Kết quả thu được: với vận tốc ly tâm 1.200 xg/20 phút, hơn 95% tế bào PBMCs được chiết từ 6 ml máu toàn phần được tìm thấy vẫn sống với hemocytometer. Sự hòa tan của formazan trong DMSO/NH3 tốt hơn trong dung môi DMSO (dimethyl sulfoxide), isopropanol và isopropanol/HCl. PBMCs tăng trưởng tốt nhất trong môi trường nuôi cấy có FBS 10%, mật độ 104-105 tế bào/giếng và PHA 1,5%. Các điều kiện tối ưu này có thể ứng dụng cho các thử nghiệm khảo sát tác động của dược liệu hay chất hóa dược mới trên sự tăng trưởng tế bào PBMCs.
Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Tập 55, Số chuyên đề: Công nghệ Sinh học